Метод определения протеина (белка) основан на сравнении интенсивности окраски биуретовой реакции исследуемого крахмала с окраской той же реакции образца крахмала с известным содержанием протеина. Биуретовой реакцией называют фиолетовое окрашивание, которое дают растворы, содержащие белок, при прибавлении к ним избытка едкой щелочи и небольшого количества CuS04.
Три грамма воздушносухого кукурузного крахмала помещают в фарфоровую ступку, приливают 25 мл 0,2% -ного раствора NaOH в 50%-ном этиловом спирте и тщательно перемешивают. Содержимое ступки на протяжении часа периодически перемешивают и затем фильтруют. 10 мл фильтрата помещают в центрифужную пробирку, куда приливают 2 мл 30%-ного NaOH, 6 мл воды и 2 мл 5%-ного раствора CuS04.
Смесь перемешивают в течение 15 сек и центрифугируют 3 мин. Полученный при этом прозрачный фиолетовый раствор помещают в колориметр Дюбоска и сравнивают со стандартным раствором, который приготовляют таким же способом из образца крахмала, содержание протеина в котором заранее определено методом Кьельдаля.
Изменяя высоту столба испытуемого раствора в колориметре, достигают однородной окраски обоих полей зрения. Затем по шкале отсчитывают высоты слоев испытуемого и стандартного растворов и процентное содержание белка в исследуемом крахмале вычисляют по формуле:
Б = А х Н1 : Н2 ;
где: Л — содержание белка в стандартном крахмале (определенное по, методу Кьельдаля) в ,%; Н1— высота столба стандартного раствора в колориметре в
мм. Н2 — высота столба испытуемого раствора в колориметре в мм. Стандартный раствор белковой вытяжки дает довольно устойчивую окраску биуретовой реакции и может оставаться в течение нескольких часов (6—8) без изменения.
Определение белкового азота.
Метод основан на способности белков коагулировать под влиянием гидрата окиси меди при отсутствии щелочи. Это позволяет отделить их от остальных азотистых соединений (аминокислот, амидов, аммиака, азотнокислых и других соединений). Дальнейший ход определения азота не отличается от уже описанного.
Техника анализа.
Навеску исследуемого вещества, помещают в химический стакан, приливают 50 мл дистиллированной воды, нагревают на водяной бане до 50—55 °С и выдерживают при этой температуре 45 мин, часто помешивая. В стакан приливают 25 мл раствора медного купороса (60 г CuS04 на 1 л воды) и при помешивании 25 мл раствора NaOH (12,5 г на 1 л воды). При этом жидкость в стакане не должна иметь щелочной реакции, так как щелочь пептизирует скоагулированные белки. Для лучшей фильтрации можно добавить к жидкости 2—3 мл насыщенного на холоду раствора алюмокалиевых квасцов. После отстаивания осадка жидкость сливают на воронку с беззольным фильтром, а осадок промывают 3—4 раза через тот же фильтр декантацией с теплой водой (температура не более 60 °С); затем осадок количественно переносят на фильтр и вновь промывают теплой водой, пока не прекратится качественная реакция на сульфат с хлористым барием. Воронку с фильтром подсушивают и подсушенный фильтр с осадком переносят в колбу Кьельдаля для сжигания и определения азота, как обычно. В полученный результат рекомендуется внести, поправку на азот, который может быть в фильтре. Для этого сжигают 10 фильтров и определяют в них содержание общего азота.
